深度解析冻存操作要点与冻存液选择指南

细胞冻存是细胞研究和应用中的关键环节，它如同为细胞按下“暂停键”，让细胞在低温中“冬眠”，待到需要时再唤醒。无论是科研人员保存珍贵的细胞样本，还是细胞治疗领域对细胞的长期储存，细胞冻存技术都发挥着至关重要的作用。今天，就让我们深入了解一下细胞冻存的操作步骤，以及细胞冻存液如何选择。

（一）冻存前的准备

3. 冻存液准备：选择合适的冻存液，如传统DMSO冻存液或新赛美细胞冻存液。

（二）冻存步骤

1. 细胞收集：轻轻吸去培养基，用DPBS缓冲液清洗细胞，去除残留的培养液。加入适量胰酶，待细胞从培养瓶壁脱落，制成均匀的细胞悬液。

2. 细胞离心：将细胞悬液转移到离心管中，以1000rpm的速度离心5分钟，去除上清液，保留细胞沉淀。

3. 制备冻存液：如果是传统DMSO冻存液，按培养基：血清：DMSO = 7:2:1的比例配制。如果是Witcel细胞冻存液，直接使用即可。

4. 细胞重悬与分装：用配好的冻存液将细胞沉淀重悬，调整细胞密度至5×10⁶/ml-1×10⁷/ml。将细胞悬液分装到冻存管中，每管1-1.5ml，标记好信息。

5. 降温冻存：

• 传统DMSO冻存液：将冻存管放入程序降温盒中，以-1℃/min的速率缓慢降温至-80℃。如果没有程序降温盒，可先将冻存管放入4℃冰箱1小时，再移至-20℃冰箱2小时，最后放入-80℃冰箱过夜。24小时后，转移到液氮罐中长期保存。

• Witcel无血清细胞冻存液：无需程序降温，直接将冻存管放入-80℃冰箱即可，24小时后转移到液氮罐中长期保存。

（三）复苏步骤

1. 快速解冻：从液氮罐中取出冻存管后，迅速放入37℃温水中快速解冻，时间控制在1分钟内。

2. 细胞处理：将解冻后的细胞悬液转移到含有大量培养液的离心管中，离心去除冻存液，然后用新鲜培养液重悬细胞，接种到培养瓶中，放入培养箱中培养。

3. 观察细胞：次日更换培养液，观察细胞生长状态，确保细胞活性良好。

为什么干细胞和免疫细胞需要专用冻存液？

干细胞和免疫细胞具有独特的生物学特性，对冻存条件要求极高。传统的DMSO冻存液虽然通用性强，但在冻存干细胞和免疫细胞时，可能会导致细胞活性下降、分化潜能受损等问题。而Witcel专用的细胞冻存液通过优化配方，能够有效保护这些细胞的活性和功能，确保其在复苏后仍能保持良好的生物学特性。